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多肽的溶解與保存

多肽的溶解與保存 
建議先用少量肽來試驗最適溶解方法,只有當多肽完全溶解后,
才能加入溶液并將之稀釋至最終濃度。即先溶解,后加入緩
沖液。注意:總是將多肽加入到適當溶劑中攪拌,而不能采
用其它方式。

凍干多肽的溶解
多肽溶解中的主要問題是二級結構的形成。

雖然疏水肽鏈二級結構的形成更明顯,但除了最短的肽鏈外,該現象發生在幾乎所有肽鏈,與極性無關。因此,溶解多肽的第一個原則是用無菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無氧水)。

多肽溶液可能遇到細菌降解。為避免該現象的發生,多肽應溶解在無菌的蒸餾水中,或者用0.45或0.2µm孔徑的濾膜過濾除菌。

包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化,因此應該溶于無氧的水中。無氧水可以通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。

若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會引起溶液發熱和多肽降解。

若多肽中包含多個堿性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;對于疏水性非常強的多肽,則使用50%乙酸。

若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙-基-嗎-啡或重碳酸鹽等揮發性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調整。

異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機溶劑的量則必須很少,否則將嚴重影響滯留時間。

若多肽因為含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側鏈而高度疏水,或為中性肽時,DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。

a. 高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二級結構而助溶。

b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾。

c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達30%),滴加至多肽溶解。

d. 反相層析時,DMF將與洗脫液前峰一起流出,依進樣量的多少,峰值可能很高。大多數肽能在大量DMF流出后幾分鐘內流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將降低。 
 
凍干多肽的保存

所有標明“保持凍干”的產物,都必須保存在冰凍條件下,最好-20℃,若保存在-10℃以下,大多數肽可維持幾年的活性。

當使用冰凍產品時,開蓋之前,瓶或試管應在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內升至室溫。對于保存于-20℃的產品,這個過程需要一小時或更長,隨包裝大小而異。否則,當瓶打開時,水氣進入導致多肽凝縮而降低其穩定性。一旦打開,應迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,尤其親水肽更應注意。 

溶液多肽的保存

多肽溶液比干粉的穩定性差很多,為了得到最好結果,遵循下列原則:

反復凍融有損于肽的活性,所以建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少,用后棄掉剩余物。

溶于pH5~7無菌的緩沖液中,貯存于-20℃。

包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此須保存在無氧化劑的環境中。

由于細菌能降解多肽,因此貯存前必須過濾除菌。

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